Estudo sobre a relação entre os princípios ativos funcionais das folhas da amoreira e a saúde humana

Folha de amoreiraé um alimento que pode ser usado como remédio e alimento, e é amplamente cultivado na China. A folha de amoreira pode ser usada como suplemento e alimento funcional para prevenir e aliviar doenças metabólicas, e é usada em doenças metabólicas (obesidade, diabetes tipo 2, doença cardiovascular e doença hepática gordurosa não alcoólica). A folha de amoreira pode ser consumida como chá, pó ou extrato para tratar e controlar condições de saúde. Explorando a eficácia ativa e os efeitos defolha de amoreiraajudará a desenvolver a utilização de alto valor dos recursos de folhas de amoreira e fornecerá uma base científica para a eficácia ativa necessária para a saúde humana.

01Melhoria da esteatose hepática em camundongos db/db induzida por dieta rica em gordura

Fundo

O diabetes tipo 2 tem muitas complicações. A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) e a esteato-hepatite não alcoólica (EHNA) são duas complicações associadas ao aumento do acúmulo de lipídios no fígado. Estudos anteriores mostraram quefolha de amoreiraO extrato aquoso (MLE) tem os efeitos de reduzir os níveis de lipídios no sangue periférico, inibir a expressão da sintase de ácidos graxos (FASN) e aumentar a atividade das enzimas antioxidantes hepáticas superóxido dismutase (SOD) e catalase.

Métodos

Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos do MLE e seu principal componente ácido neoclorogênico (nCGA) na redução de lipídios séricos, redução do acúmulo de lipídios hepáticos e melhora dos níveis de esteato-hepatite. As atividades antioxidantes da glutationa (GSH), glutationa redutase (GRd), glutationa peroxidase (GPx), glutationa S-transferase (GST) e superóxido dismutase (SOD) foram avaliadas, e a catalase foi testada em camundongos alimentados com MLE e nCGA.

Resultados

Comparado com os grupos de camundongos db/m e db, o perfil lipídico sérico e as pontuações de fígado gorduroso no grupo HFD foram significativamente aumentados, enquanto a atividade antioxidante hepática no grupo HFD foi significativamente diminuída. Quando alimentados com HFD + MLE ou nCGA, o perfil lipídico sérico, o estado de deposição de gordura hepática, o nível de esteato-hepatite e a atividade antioxidante hepática foram significativamente melhorados em comparação com o grupo HFD. Embora MLE e nCGA não tenham afetado diretamente os níveis de glicose no sangue em camundongos db/db, eles regularam o metabolismo lipídico anormal. Esses resultados demonstram o potencial de MLE/nCGA no tratamento de fígado gorduroso diabético induzido por glicotoxicidade em modelos animais.

Conclusão

Este experimento mostra que MLE e nCGA mostram boas perspectivas na prevenção e tratamento de fígado gorduroso diabético. Está provado que folhas de amoreira podem efetivamente aumentar a atividade de enzimas antioxidantes do fígado, inibindo assim a lipogênese, e especula-se que MLE previne a formação de fígado gorduroso diabético reduzindo os níveis de colesterol no sangue. No entanto, mais pesquisas são necessárias no futuro para estudar o mecanismo molecular dos efeitos inibitórios de MLE e nCGA e explorar a eficácia de outros compostos potenciais na prevenção e tratamento de fígado gorduroso diabético.

02 Nanopartículas lipídicas de folhas de amoreira: uma plataforma natural de administração oral de CRISPR/Cas9 direcionada para aliviar doenças do cólon

Resumo

O tratamento oral de doenças do cólon usando o sistema CRISPR/Cas9 tem sido dificultado pela falta de uma plataforma de entrega segura e eficaz. O CD98 superexpresso desempenha um papel vital na progressão da colite ulcerativa (UC) e do câncer colorretal associado à colite (CAC). Neste estudo, nanopartículas lipídicas (LNP.S.) derivados de folhas de amoreira foram funcionalizados com copolímeros Pluronic e otimizados para fornecer mecanismos de edição de genes CRISPR/Cas para knockout de CD98. Os LNPs obtidos tinham um diâmetro hidrodinâmico de 267,2 nm, uma distribuição de tamanho estreita e uma carga superficial negativa (-25,6 mV). A incorporação de Pluronic F127 em LNPs melhorou sua estabilidade no trato gastrointestinal e facilitou sua penetração na barreira do muco colônico. O grupo terminal galactose promoveu a internalização de LNPs por macrófagos via endocitose mediada por receptor de asialoglicoproteína, com uma eficiência de transfecção 2,2 vezes maior do que a de Lipofectamine 6000. Os LNPs reduziram significativamente a expressão de CD98, diminuíram as citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-6), aumentaram os fatores anti-inflamatórios (IL-10) e polarizaram os macrófagos para o fenótipo M2. A administração oral de LNPs aliviou a UC e a CAC reduzindo a inflamação, restaurando a barreira colônica e modulando a microbiota intestinal. Como o primeiro LNP de entrega oral de CRISPR/Cas9, este sistema fornece uma plataforma precisa e eficiente para o tratamento oral de doenças do cólon.

Conclusão

Neste estudo, foi desenvolvida uma plataforma de administração oral de CRISPR/Cas9 baseada em lipídios de amoreira comestíveis e Pluronic F127. As nanopartículas lipídicas resultantes (P127M@pCD98) mantiveram a estabilidade durante a passagem pelo trato gastrointestinal, permearam a barreira de muco e penetraram no tecido da colite e no tecido tumoral colorretal. P127M@pCD98s podem ser internalizados especificamente por macrófagos por meio de endocitose mediada por receptor de galactose e, subsequentemente, escapar dos lisossomos. Experimentos in vitro mostraram que P127M@pCD98s aliviaram a resposta inflamatória ao regular negativamente a expressão de CD 98, polarizando macrófagos para o fenótipo anti-inflamatório M2 e reduzindo a liberação de TNF-α e IL-6. A administração oral de P127M@pCD98 atrasou efetivamente a progressão da colite ulcerativa e do câncer colorretal associado à colite, enriqueceu bactérias benéficas e reduziu a abundância de bactérias prejudiciais. Coletivamente, esses resultados demonstram pela primeira vez a viabilidade de LNPs (P127Ms) como uma plataforma de administração oral de CRISPR/Cas9 para o tratamento oral eficaz de doenças do cólon.

03 Nanopartículas lipídicas naturais extraídas de folhas de amoreira para tratamento direcionado de carcinoma hepatocelular por via oral

Resumo

As terapêuticas tradicionais para câncer de fígado são severamente limitadas em sua aplicação clínica devido às suas reações adversas e eficácia insatisfatória. Inspiradas pelo conceito de "remédio e alimento são da mesma origem", nanopartículas lipídicas naturais semelhantes a exossomos (LNPs) foram extraídas e purificadas de folhas de amoreira-preta. As MLNPs obtidas têm um tamanho de partícula hidrodinâmico ideal (162,1 nm), distribuição de tamanho uniforme (índice de polidispersão = 0,025) e carga superficial negativa (-26,6 mv). Essas LNPs naturais são ricas em glicolipídios, proteínas funcionais e pequenas moléculas ativas (por exemplo, rutina e quercetina 3-O-glicosídeo). Experimentos in vitro mostraram que as MLNPs foram internalizadas preferencialmente por linhagens de células tumorais do fígado por meio de endocitose mediada por receptor de galactose, aumento do estresse oxidativo intracelular e desencadeamento de dano mitocondrial, inibindo assim a viabilidade, migração e invasão dessas células. Importante, estudos in vivo mostraram que MLNPs orais entram no sistema circulatório principalmente através do jejuno e cólon, e têm reações adversas insignificantes e excelentes efeitos antitumorais hepáticos ao matar tumores diretamente e regular a flora intestinal. Essas descobertas demonstram coletivamente o potencial de MLNPs como um nanomedicina natural, seguro e poderoso para tratamento oral de carcinoma hepatocelular.

Conclusão

Nanovesículas naturais semelhantes a exossomos foram extraídas e purificadas de folhas frescas de amoreira-preta. Para o tratamento de carcinoma hepatocelular. Essas nanopartículas lipídicas derivadas de folhas de amoreira-preta (MLNPs) contêm uma variedade de componentes funcionais, incluindo lipídios, proteínas e flavonoides, entre os quais a galactose foi identificada como um alvo potencial para direcionamento de tumores hepáticos. Além disso, elas exibiram excelente estabilidade sob condições gastrointestinais simuladas e mostraram excelente biocompatibilidade, tornando-as muito adequadas para aplicações in vivo. Experimentos in vitro mostraram que os grupos galactose na superfície das MLNPs promoveram sua internalização específica por células Hepa1-6 e aumentaram sua citotoxicidade contra células tumorais hepáticas. Os resultados mostraram que as MLNPs poderiam interromper o ciclo celular Hepa1-6 na fase G0/G1 e induzir a apoptose celular. Elas também desencadearam um aumento nos níveis de ROS intracelulares e inibiram significativamente a proliferação e migração de células cancerígenas hepáticas. A biossegurança dos MLNPs orais foi superior à da administração intravenosa e não causou imunogenicidade ou efeitos colaterais tóxicos. Em um modelo murino de câncer primário de fígado, os MLNPs orais mostraram capacidades significativas de direcionamento e enriquecimento do fígado, inibiram significativamente o crescimento do tumor e regularam o equilíbrio microbiano intestinal. Em conclusão, os MLNPs representam uma nanomedicina natural, segura e ecologicamente correta com capacidades especiais de direcionamento de tumor de fígado, que pode ser usada para tratamento oral de carcinoma hepatocelular.

04 Interação entre polifenóis e polissacarídeos da amoreira durante a digestão e fermentação colônica

Resumo

As características de digestão e absorção de polifenóis de amoreira (MLPP), polissacarídeos de amoreira (MLPS) e complexos de polifenol-polissacarídeo de amoreira (PPPS) durante a fermentação foram comparadas, e as mudanças em ácidos graxos de cadeia curta (SCFAs) durante a fermentação foram analisadas. O efeito de PPPS na composição estrutural da flora intestinal foi estudado com base no sequenciamento do gene 16S rDNA. A digestibilidade de polifenóis em MLPP e PPPS foi de 59,48% e 79,95%, respectivamente, enquanto nenhum monossacarídeo livre foi detectado em MLPS e PPPS, indicando que os polissacarídeos promoveram a digestão de polifenóis em PPPS, enquanto a presença de polifenóis não teve efeito na digestão de polissacarídeos. A produção de ácido acético, ácido propiônico, ácido valérico e ácido butírico no grupo PPPS aumentou significativamente durante o processo de fermentação de 0-12 h, e o valor do pH caiu drasticamente, enquanto o grupo MLPS produziu mais ácido isobutírico e ácido isovalérico durante o estágio de fermentação de 12-24 h. O PPPS aumentou significativamente a abundância relativa de Fusobacterium, enquanto reduziu significativamente a abundância relativa de Collinsella aerofaciens, Romboutsia ilealis e Lachnospiraceae, o que pode estar relacionado à regulação sinérgica do metabolismo lipídico por polifenóis e polissacarídeos.

Conclusão

Neste estudo, um modelo de simulação de digestão humana e fermentação colônica foi estabelecido para estudar as diferenças na composição dos componentes da amoreira MLPP, MLPS e PPPS após a digestão, bem como as mudanças no pH, SCFAs e flora intestinal durante a fermentação colônica. Os resultados mostraram que no grupo PPPS, a presença de polissacarídeos promoveu a digestão de polifenóis, enquanto a digestão de polissacarídeos não mudou e nenhum monossacarídeo foi liberado. Durante o processo de fermentação de 0-12 h, os principais componentes dos SCFAs foram ácido acético, ácido propiônico, ácido butírico e ácido valérico; durante o processo de fermentação de 12-24 h, os principais componentes dos SCFAs foram ácido isobutírico e ácido isovalérico. O PPPS teve um efeito significativo no valor de queda de pH, no conteúdo e na composição dos SCFAs, e o efeito foi melhor do que MLPP e MLPS. Durante o processo de fermentação colônica, o PPPS aumentou a abundância relativa de Fusobacterium e reduziu a abundância relativa de Collinsella aerofaciens, Romboutsia e Lachnospiraceae, e seu efeito foi o melhor, o que pode ser a razão para a regulação sinérgica do metabolismo lipídico por polifenóis e polissacarídeos. Os resultados deste estudo ajudarão a revelar a base material e a conotação científica da atividade funcional da amoreira, especialmente o efeito sinérgico de polifenóis e polissacarídeos na regulação do metabolismo lipídico, e fornecerão orientação para o desenvolvimento de alimentos funcionais com compatibilidade de ingredientes ativos.